ELISA vs WB，怎么選？牢記這幾點(diǎn)
蛋白質(zhì)分析和鑒定方法***常用的就是ELISA和Western Blot（以下簡稱WB），那到底該選哪種呢？
ELISA簡單，還是WB簡單？
是不是二選***就可以了？
ELISA和WB都是基于抗原-抗體特異性結(jié)合的原理，主要區(qū)別在于： ELISA對(duì)于抗原、抗體都能檢測(cè) WB則主要檢測(cè)抗原 此外，了解這兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，即可輕而易舉地解決如何選擇的問題。 ELISA 靈敏度高、應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，檢測(cè)樣本濃度可低至pg/ml，操作相對(duì)簡單，用于確定樣品中是否存在蛋白質(zhì)的高效方法，亦可精確定量蛋白質(zhì)的濃度。 ELISA 具有包被、封閉、檢測(cè)、 結(jié)果讀取4個(gè)常規(guī)操作步驟，有直接、間接、夾心及競(jìng)爭檢測(cè)4種主要類型。 ELISA直接、間接、夾心檢測(cè)示例 ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線示例 ELISA的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：適合體液(血清、尿液等)、細(xì)胞上清樣本；靈敏度高，操作簡單、高效、快速（1-2h），需樣品量較少，可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣本分析。另外，也可靈活地DIY 檢測(cè)試劑盒，即可降低成本，又解決了實(shí)驗(yàn)需求；同時(shí)ELISA可搭配實(shí)驗(yàn)室高通量或自動(dòng)化設(shè)備，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。 缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)操作過程中，由于操作問題、樣品污染、使用低質(zhì)量試劑等原因，其特異性方面經(jīng)常受到影響，可能會(huì)產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果；此外試劑盒中的抗體組分須低溫運(yùn)輸、儲(chǔ)存；ELISA無法提供有關(guān)目標(biāo)蛋白的質(zhì)量和豐度等其他信息。 Western Blot 是***種通過電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體孵育、成像等步驟對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行檢測(cè)的方法，操作流程相對(duì)復(fù)雜，用于識(shí)別和了解蛋白質(zhì)的***些特征元素、蛋白質(zhì)相互作用和修飾等，可提供目標(biāo)蛋白的詳細(xì)信息，如蛋白質(zhì)大小和豐度等，也常被用于ELISA和其他檢測(cè)方法結(jié)果的驗(yàn)證，它可以有效地幫助排除假陽性或假陰性的結(jié)果。 Western Blot的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：適用于組織或細(xì)胞裂解液樣本；檢測(cè)結(jié)果簡單易懂；特異性高，能夠從多種蛋白質(zhì)中識(shí)別目標(biāo)蛋白；可提供目標(biāo)蛋白的分子量、表達(dá)豐度等信息；熒光Western Blot，可以在***個(gè)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多重檢測(cè)，檢測(cè)多種蛋白質(zhì)。 缺點(diǎn)：傳統(tǒng)操作步驟繁瑣、耗時(shí)（1到2天），體系如果沒有優(yōu)化，容易出現(xiàn)信號(hào)衰減快、高背景等情況，導(dǎo)致不理想的檢測(cè)結(jié)果；同時(shí)檢測(cè)靶蛋白的數(shù)量受限于***抗和二抗的組合；通常被用作驗(yàn)證方法。 使用iBright 成像系統(tǒng)捕獲的熒光Western Blot圖像示例 那到底怎么選呢，ELISA or Western Blot？ 若實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖切枰唵巍⒖焖俚卮_定蛋白質(zhì)是否存在，并需要得到精確濃度，ELISA是更好的選擇。 若實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖切枰玫礁嚓P(guān)于蛋白質(zhì)的信息，比如分子量、純度、蛋白質(zhì)間相互作用、蛋白質(zhì)表達(dá)變化或翻譯后修飾等，則Western Blot更適合。 此外，Western Blot和ELISA檢測(cè)的結(jié)果也可相互印證。
(文章來源于儀器網(wǎng))
